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低速離心機在提取細胞質和細胞核蛋白中的應用
發布時間:2018-10-12   點擊次數:553次

  蜀科低速離心機操作簡單、運行平衡、性能穩定、安全可靠,入選“國產好儀器”,在臨床醫學,放射免疫、生物化學、食品衛生、環保等科研領域都有廣泛應用。今天來介紹一下低速離心機在提取細胞質和細胞核蛋白中的應用。

  提取細胞質和細胞核蛋白的操作步驟如下:

  1、決定細胞生長狀態,細胞生長狀態應該是80%或者更好:
  2、用蜀科離心機以1500r/min離心5min
  3、棄上清液,用等體積的冷PBS洗細胞,像步驟2那樣,反復3次
  4、根據估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細胞顆粒中,使細胞溫和懸浮,盡量避免泡沫
  5、加入裂解液lysis buffer在懸浮的細胞中,并放在冰上15min讓細胞膨脹,可以通過顯微鏡檢查
  6、對于細胞實驗中膨脹的細胞,加入10%的IGEPAL CA-630使最后的濃度達到0、3%,混勻,加的時候要溫和
  7、立即用蜀科
低速離心機離心(量大的可以用1、5ml的 EP管,以5500r/min離心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min)
  8、轉移上清液(細胞質蛋白)到一個新的冷凍管中
  9、用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細胞,并混勻。
  10、用離心機離心細胞懸浮液,以1500r/min離心5min,移掉上清液
  11、用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒
  12、把管子放置在震蕩混勻器上,以700r/min,15min震蕩混勻,接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細,避免泡沫產生
  13、以9400r/min離心15min,低溫離心完后轉移上清液到一個新的冷凍離心管中
  14、分成幾份用液氮冷凍,并且保存起來(長期保存應放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)。
  蜀科儀器專注于離心機的研發、生產、銷售,產品遠銷海內外,
低速離心機各項指標更是處于行業優勢地位,還可提供定制服務。

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